Эта правительница родилась 6 ноября 1479 года в Толедо, столице королевства Кастилии, в семье Изабеллы I Кастильской и Фердинанда II Арагонского (королевский дом Трастамара). У нее было три сестры и брат: Изабелла, королева Португалии; Хуан, принц Астурийский; Мария, королева Португалии; Екатерина, королева Англии. Хуан умер в 19 лет. Изабелла умерла в 1498 году, сразу после рождения сына. Хуану описывают как умную молодую женщину, которая получила хорошее образование. Она любила читать и могла говорить на основных языках Пиренейского полуострова (кастильский, леонский, галисийско-португальский и каталанский языки), а также на латыни и французском. Ее образование было направлено главным образом на то, чтобы превратить девушку в подходящую жену. Будущий брак должен был создать королевский союз, расширить возможности страны и поддерживать мирные отношения с другими державами. В результате она изучала каноническое и гражданское право, геральдику, грамматику, историю, математику и философию, также читала много классической литературы. Педагогами Хуаны были: доминиканский священник Андрес де Миранда, Беатрис Галиндо и ее мать. Она также брала уроки по этикету, танцам, рисованию, вышивке и шитью, имела талант к музыке, обучалась охоте. Ее мать учредила испанскую инквизицию в 1478 году, но сама Хуана оказалась скептиком и не интересовалась католическими обрядами. Это разгневало королеву Изабеллу и привело к серии наказаний. Девушку подвесили на веревке, а к ногам привязали гири.
Хуана стала наследницей испанских королевств после смерти ее брата, ее сестры Изабеллы, ее сына Мигеля и мертворожденной дочери Хуана. В 1502 году она была признана наследницей кастильского престола и престола Арагона. В 1504 году умирает мать Изабелла, оставляя Хуану в качестве королевы Кастилии. Это означало, что ее отец, Фердинанд II, потеряет свой монархический статус. Однако в завещании королевы указывалось, что он может руководить страной, если дочь не захочет управлять, пока ей не исполнилось 20 лет. Ее знают как Хуану Безумную и не без оснований. Признаки психической нестабильности начали проявляться с 1504 года. Доказательство ее психического расстройства проявилось, когда умер ее муж в 1506. Хуана очень долго отказывалась отпускать его забальзамированное тело. В какой-то момент она приняла его захоронение, чтобы потом эксгумировать тело и хранить в помещении. В конце концов, королева согласилась похоронить его прямо под окном дома.
Когда ей было всего 17 лет, Хуана обручилась с Филиппом Красивым из Австрии, герцогом Бургундским, единственным сыном императора Максимилиана I. Он был известен как Красивый из-за его стальных серо-голубых глаз и светлых волос. Они поженились в Льере, и, хотя это был договорный брак, призванный объединить Габсбургов и династию Трастамара, по-видимому, у них были страстные отношения. В то время как чувства Филиппа вскоре рассеялись, и он нашел другие любовные интересы,
Хуана оставалась преданной своему мужу на протяжении всей жизни. На самом деле, она любила его так сильно, что новость о его неверности довела ее до депрессии и безумия. У них было шестеро детей: два мальчика и четыре девочки. Все они стали императорами или королевами. Хуана Кастильская скончалась 12 апреля 1555 года в возрасте 75 лет. Это значительно превышает ожидаемую продолжительность жизни в те времена.