Будущий музыкант пришел в наш мир 9 марта 1910 года в Уэст-Честере, штат Пенсильвания. Его отец был врачом по профессии, казначеем в пресвитерианской церкви и президентом школьного совета города. Мать, Маргарита Маклеод, была опытной пианисткой. Сэмюэл родился старшим из двух детей своих родителей. У него была младшая сестра по имени Сара (на три года младше). Он посвятил ей многие свои самые ранние песни, а позже сказал, что Сара понимала его лучше, чем родители. С ранних лет мальчик проявлял большой интерес к музыке. Барбер начал учиться игре на фортепиано в возрасте шести лет, возможно, вместе с мамой. В период с июля по декабрь 1917 года им было написано три произведения. Поскольку его мать не любила пианистов-мужчин, Сэмюэл начал свои профессиональные уроки музыки с игры на виолончели, хотя и продолжал учиться игре на фортепиано, а к 1919 году написал ряд пьес для фортепиано. К 11 годам Барбер начал изучать игру на органе, продемонстрировав мастерство на этом инструменте в пресвитерианской церкви. Через год стал органистом церкви, зарабатывая 100 долларов в месяц. В ранние годы его тетя по материнской линии, оперная певица Луиза Гомер и ее муж-композитор также сыграли важную роль в музыкальном обучении юноши. Несмотря на его целеустремленную преданность музыке, он оказался отличным учеником в школе, преуспев во многих внеклассных занятиях, был членом школьного латинского и французского клубов, президентом музыкального и драматического кружков и литературным редактором ежеквартального издания. К 1924 году родители согласились позволить ему учиться в недавно открытом Музыкальном институте Кертиса в Филадельфии.
Сэмюэла Барбера больше всего помнят по его работе 1936 года «Адажио для струнных». Произведение, впервые исполненное Артуро Тосканини 5 ноября 1938 года, прочно вошло в концертный репертуар оркестров и продолжает исполняться в телешоу и фильмах. «Ноксвилл: лето 1915 года» — еще одно из его знаменитых произведений, действие которого положено на стихотворение Джеймса Эйджи, было впервые представлено в 1948 году Элеонорой Стебер и Бостонским симфоническим оркестром. Спектакль имел большой успех и не менее популярен на протяжении многих лет.
Композитор поддерживал давние отношения с Джанкарло Менотти, итальянско-американским композитором и либреттистом. Они познакомились, когда учились в Музыкальном институте Кертиса. В то время, когда на гомосексуализм смотрели свысока, их отношения вызвали настоящий скандал. Около 12 лет Барбер также поддерживал тесные отношения с Валентином Эрранцем. Это также привело к предположениям, что Сэмюэл был геем, к большому разочарованию многих его покровителей. Музыкант умер от рака 23 января 1981 года в Нью-Йорке в возрасте 70 лет. Позже его останки были доставлены в его родной город (Уэст-Честер), где он был похоронен на кладбище Оклендс. У него остались зять и множество двоюродных братьев, племянников и племянниц. После его смерти семья Сэмюэла Барбера попросила людей вместо цветов прислать свои пожертвования в
Медицинский центр Нью-Йоркского университета, Департамент медицины или в Исследовательский центр лейкемии Нью-Йоркского университета.