Этот яркий представитель кинематографа пришел в наш мир 1 апреля 1920 года в городе Циндао, Шаньдун. В то время город находился под японской оккупацией. Тосиро был старшим из троих детей и с ранних лет интересовался фотографией. Провел большую часть своих ранних лет в Китае как гражданин Японии. В период Второй мировой войны его призвали в авиационную дивизию японской армии, где юноша служил в отделении аэрофотосъемки.
В 1947 году был принят на должность помощника оператора в японскую компанию по производству и распространению фильмов. Вскоре он появился в таких фильмах, как «Время новых дураков» и «Пьяный ангел». Позже познакомился с режиссером Акирой Куросавой и снялся в нескольких его фильмах, таких как «Бездомный пес» (1949) и «Скандал» (1950). Актер заработал популярность благодаря роли бандита Тадземару в фильме 1950 года «Расемон». Этот фильм считается одним из лучших когда-либо созданных фильмов и представляет собой психологический триллер режиссера Акиры Куросавы. Фильм получил несколько наград, в том числе премию «Голубая лента» в категории «Лучший сценарий» и «Золотой лев» на Венецианском кинофестивале. Он также получил почетный «Оскар». Популярность Мифунэ росла по мере того, как он продолжал работать с известным режисером. Тосиро изображал самураев в нескольких фильмах, таких как «Семь самураев» в 1954 году и «Три негодяя в скрытой крепости», который вышел в 1958 году. Также снялся в адаптациях Куросавы западной литературной классики, в том числе в картине по роману Федора Достоевского «Идиот», «Трон в крови» (1957), по шекспировскому «Макбету» (1957) и по пьесе Максима Горького «Нижние глубины». Заключительной точкой в сотрудничестве актера с режиссером стала картина 1965 года «Рыжая борода», которая имела огромный коммерческий успех, хотя между Мифунэ и Куросавой возник спор, из-за которого они больше не работали в будущем. В течение следующих трех десятилетий актер продолжал сниматься в нескольких других фильмах, в том числе «Красное солнце» (1971), «Бумажный тигр» (1975), «Вызов» (1982), «Принцесса с Луны» (1987) и «Тень волка» (1992). Тосиро также появился в нескольких телешоу, таких как «Сёгун» (1980).
Тосиро Мифунэ влюбился в Сатико Ёсимине, которая была одной из его коллег-исполнительниц. Пара поженилась в феврале 1950 года. Хотя супруга была буддисткой, а Мифунэ — христианином, они связали себя узами брака в церкви согласно христианской традиции. У пары родилось двое детей по имени Сиро и Такэси. У актера также была любовница (у них появилась на свет дочь по имени Мика, которая стала актрисой). Этот талантливый представитель кинематографа скончался 24 декабря 1997 года из-за полиорганной недостаточности. Место смерти — Митака, Токио.